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Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52

简要描述:Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52
(1)DE52纤维素。
(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。
(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材

  • 产品型号:C8930-100
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-08-07
  • 访  问  量:3168

详细介绍

Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52

产品信息:  

    纤维素DE-52为中等碱性阴离子交换剂,柱层析用于吸附剂,用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。

纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体

该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。

1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g,置于1000ml烧杯中,先以蒸馏水漂浮除去细颗粒,再经酸碱处理后,用0.01~0.05mol/L,pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干,或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤,收集湿纤维素,以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52,经过充分搅拌,置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次,即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便,既可小量提取,也可大量制备。

2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)

【材料和试剂】

(1)DE52纤维素。

(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L,pH8.0 PB;0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/L NaCl。

(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。

(4)1.5×50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。

【操作步骤】   Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52

(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。

(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上,柱底垫一圆形尼龙纱,出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高时,吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松开出水口螺旋夹,控制流速1~2ml/min,同时连续加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后,柱面放一圆形滤纸片。

(3)平衡:松开出水口螺旋夹,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速为15滴/min,待流出液与洗脱液之pH值达到*时,停止平衡。

(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里,置4℃冰箱,对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析。

(5)加样、洗脱与收集:用吸管吸去柱面液体,以毛细吸管沿柱壁加入样品,样品体积相当于柱床体积的1%~2%,蛋白浓度为50~70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内,并用少量洗脱液清洗柱壁;待液体进入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脱,控制流速为14~16滴/min。分部收集器收集,紫外监测,或人工收集,以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值,描绘洗脱液峰。

(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并,装入透析袋,以PEG浓缩至所需体积。

Tris-PO4离子交换层析法

该法在上述方法的基础上稍加改良,即通过梯度洗脱,可用于血清中IgG和IgM的提取。

【材料和试剂】     

(1)DE52纤维素。

(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清,免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。

(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。

(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L,pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4。

【操作步骤】

(1)蛋白标本对0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4透析。

(2)DE52装柱,并以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4平衡。

(3)加样,以0.005mol/L,pH8.6 Tris-PO4洗脱,紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。

(4)以350ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4洗脱,这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。

(5)以125ml 0.055mol/L,pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱,总量收集250ml;重复步骤(5)。

(6)根据280nm峰值合并蛋白峰,透析浓缩和保存同上。

用过的DE52可用0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性,加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。

性质用途

性状:干燥细结晶或纤维状

基质 高度交联纤维素

配基 二乙基氨基乙基

配基密度 40μmol /ml

吸附载量 180mg HSA/ml

填料的颗粒大小 50μm

zui大流速 300cm/h

pH范围 3-10,在位清洗时pH范围可到2-11

化学稳定性 各种缓冲液及盐,0.5M NaOH及醋酸,8M脲,6M盐酸胍,乙醇,异丙醇等

物理稳定性 0.1M中性缓冲液中,120℃30min

层析柱装填

  1. 吸附性层析一般建议装填高度为 10~15cm 分子筛建议装填高度为60~90cm

1组装柱如有需要连接装柱器

2取下下柱头用装柱缓冲液冲洗柱底适配器排除筛网下面的气泡将下柱头安装

在层析柱底部旋紧调整旋钮并在层析柱底部保留 1cm 左右高度的液体。

3用装柱缓冲液重悬介质制成 50%~75%左右的介质悬浮液。

4一次性将介质倒入柱管中避免产生气泡。

5如连接有装柱器立即往装柱器中缓慢加入装柱缓冲液。将适配器或装柱器上盖

与层析系统相连接。

6设定所需流速+打开柱下端启动泵进行压柱。

7柱床稳定后保持 30min 以上关闭泵和底阀

8如连接有装柱器移除装柱器后连接适配器。

9调节适配器使其固定在胶面上 0.5~1cm 并保证适配器入口充满液体。

10打开底阀连接泵继续用设定的流速注意压力不要超过 0.3Mpa继续压柱

待胶面高度保持不变标记此时胶面高度

11暂停机器关闭底阀断开柱头入口调低适配器至胶面下 3~5mm 处。封闭

上柱口装柱完成。

 

蛋白层析柱/蛋白纯化柱(一端柱床可调,螺纹型)
内径(mm)耐压(bar)床层高度(mm)床层体积(mL)床层高度(mm)货号(玻璃)
1051000-70-100LK10100
102004月15日55-200LK10200
1040020-31255-400LK10400
1060035-47455-600LK10600
1080051-62655-800LK10800
10100067-78855-1000LK101000
1551000-170-100LK15100
152009.7-35.355-200LK15200
1540045-70255-400LK15400
1560080-106455-600LK15600
15800116-141655-800LK15800
151000151-176855-1000LK151000
2051000-310-100LK20100
2020017-6355-200LK20200
2040080-126255-400LK20400
20600143-188455-600LK20600
20800205-251655-800LK20800
201000268-314855-1000LK201000
2551000-490-100LK25100
2520027-9855-200LK25200
25400125-196255-400LK25400
25600223-294455-600LK25600
25800321-392655-800LK25800
251000419-490855-1000LK251000
3751000-1070-100LK37100
3720059-21455-200LK37200
37400274-430255-400LK37400
37600488-644455-600LK37600
37800703-859655-800LK37800
371000918-1074855-1000LK371000
5051000-1960-100LK50100
50200108-39255-200LK50200
50400500-785255-400LK50400
50600893-1177455-600LK50600
508001285-1570655-800LK50800
5010001678-1962855-1000LK501000

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