欢迎来到上海宸乔生物科技有限公司网站!
咨询热线

18801803238

当前位置:首页  >  技术文章  >  层析柱的装柱非常重要会直接影响层析分离效果

层析柱的装柱非常重要会直接影响层析分离效果

更新时间:2024-06-18      点击次数:1623
  层析柱的装柱非常重要,装柱的效果会直接影响层析分离效果。有湿法装柱和干法装柱等两种方法。湿法装柱很简单,使用也普遍,就是先用比固定相多一倍的洗脱剂将固定相活成匀浆,柱子底部先用脱脂棉塞紧,然后倒入洗脱剂将脱脂棉中气泡赶出。
 
  用漏斗将活好的固定相倒入柱子中,打开底部活塞,将柱子中高出固定相的溶剂放出。期间不断用橡皮棒敲打,将固定相敲实,做到密实均匀无气泡即可。
 
  很多时候用加压的方法可以很高效地装好柱子,而且在柱子中没有气泡产生。
 
  干法装柱与湿法装柱刚好相反的是,它是将干燥的吸附剂从柱子上端直接加入到一个空的柱子中,然后用油泵抽柱子底部,相当于减压过柱,直到柱子变得很结实,再用淋洗剂“走柱子”。
 
  干法装柱的一个缺点就是在装入洗脱剂后,由于溶剂和固定相之间的吸附放热,所以柱子容易变花,影响分离效果。
 
  解决的方法是:
 
  (1)固定相一定要添加结实;
 
  (2)一定要用较多的溶剂“走柱子”,直到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。无论使用哪种方法装柱,最后都要求所装的柱子结实、匀称、无气泡。
 

 

 
  上样的技巧
 
  上样也有湿法和干法之分:湿法一般用淋洗剂溶解样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好。再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁缓慢地均匀加入。
 
  在不用海沙的情况下,尽量不要破坏硅胶面。加样后,打开柱底活塞,让固定相充分地吸附所加样品。然后再加入一些洗脱剂,再充分地吸附后将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
 
  然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。很多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没关系。有的时候上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比较大量的样品才会出现,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品本身又是比较好的固体才会析出,这就需要先重结晶样品,得到大部分的产品后剩余的产品再柱分。
 
  如果不能重结晶也没关系,直接过柱就行,样品会随着淋洗剂流动而慢慢溶解,最后随着洗脱剂流出。有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱(比如DMF,DMSO等,会随着溶剂一起走,显色是一个很长的脱尾),这时就必须用干法上柱了。
 
  以上就是本篇为您分享的全部内容,希望以上的内容能够对大家有所帮助,感谢您的观看和支持,后期会整理更多资讯给大家,敬请关注我们的网站更新。

联系我们

上海宸乔生物科技有限公司 公司地址:上海市阿克苏路1187号516室   技术支持:化工仪器网
  • 联系人:王经理
  • QQ:3004300903
  • 公司传真:021-59100893-802
  • 邮箱:sales@keyanwang.com.cn

扫一扫 更多精彩

微信公众号

网站二维码