制备柱作为色谱纯化的核心设备,其性能直接决定分离效率与产品纯度。然而,80%的实验室因维护不当导致柱效衰减、交叉污染,甚至引发实验失败。本指南提供实操性步骤,助您科学延长制备柱寿命,避免冗余成本。
一、首要步骤:
每次使用后,立即执行梯度冲洗:先用高比例水相(如90%水/10%甲醇)清洗5柱体积,再用有机溶剂(如乙腈)平衡。避免使用强酸强碱(如HCl),以防填料腐蚀。例如,蛋白质纯化后,必须用0.1M NaOH冲洗10柱体积,再用缓冲液恢复至pH 7.0。若跳过此步,残留蛋白会吸附在填料表面,造成下批次污染,导致纯度下降15%以上。
二、关键环节:
长期闲置时,将制备柱浸没于80%乙醇或10%异丙醇中,密封后置于4°C冰箱。切忌暴露于空气中——填料干裂将长久损伤孔径结构。某制药企业曾因存储不当,使制备柱寿命缩短60%,单次实验成本增加30%。存储前需确认柱头无气泡,避免溶剂残留引发结块。

三、长效策略:
每10-15次运行后,执行标准再生程序:用1M NaOH或1M HCl流速0.5 mL/min冲洗30分钟,随后用缓冲液平衡。再生可清除吸附杂质,使柱效恢复至初始水平。数据显示,定期再生的制备柱分离度提升25%,而忽略再生的设备性能衰减率达40%。
四、日常监测:
每次使用前检查柱压(正常范围≤0.5 MPa)。若压力骤升20%,立即排查堵塞;若分离度下降,优先尝试再生而非直接更换。建议记录维护日志,跟踪柱压、回收率变化。某高校实验室通过此法,将制备柱年更换率从5次降至1次,年节约成本8万元。
总结:制备柱维护是“小投入大回报”的科学行为。仅需5%的设备成本用于日常维护(清洁剂、再生试剂),即可避免50%以上的性能衰减。避免“用完即弃”思维,坚持规范操作,您的制备柱将保持高效稳定,为高纯度分离提供坚实保障。