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对肽样品的质谱分析前使用SPE小柱脱盐的操作方法

更新时间:2015-07-03      点击次数:5289

对肽样品的质谱分析前使用SPE小柱脱盐的操作方法 

SPE脱盐操作对于LC-MS分析很重要,对于常规LC-UV分析不是必需操作。 

试剂和设备:所有的试剂应在使用前新鲜配制。 

当使用1 mL C18 SPE柱时 (货号:218SPE1000)时,推荐的操作方法是: 

  1. 1.0 mL 乙腈预活化小柱。 
  2. 0.5 mL 0.1% TFA水溶液预平衡小柱。然后用0.5mL再重复一次。 
  3. 0.2 mL 含有0.1-0.2% TFA的肽样上样到SPE柱上,肽被SPE保留。 
  4. 0.5 mL 0.1% TFA水溶液清洗SPE小柱,除去弱保留的杂质。 
  5. 0.2 mL 75:25 (或甚至 90:10) 不含任何TFA的乙腈/水溶液将肽从SPE柱上洗脱下来。 
  6. 使用氮气流(或使用真空离心管,加热不应超过30摄氏度)将洗脱收集物挥发至约10 μL。 
  7. 加入190 μL 含有0.2% 甲酸和 0.01% TFA的 5:95 乙腈/水溶液。 
  8. 涡旋混合后,样品存放在冰箱中。此样品即可用于LCMS进样分析。 

注意:要让溶液流过SPE小柱,可在SPE柱管上方施加正压。施加正压的办法可以是将一个1000μL 塑料吸液枪头(pipet tip)加在氮气管路上,然后将此吸液枪头摁在SPE小柱的顶端开口端。

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