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看完本篇你就知道什么是蛋白层析柱了

更新时间:2024-08-08      点击次数:2330

  蛋白质是生命活动的物质基础,也是生物体内的功能性大分子。随着分子生物学、结构生物学、生物制药行业等研究的不断深入,蛋白质纯化成为近年来越来越热的研究话题。

  蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如RNA、DNA 等分开,常用的方法为硫酸铵沉淀法。

  精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来,常用的方法有:凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。其中,凝胶过滤层析是常见的纯化手段之一。

  蛋白层析柱是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。不同蛋白的形状及分子大小存在差异,在混合物通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时,由于各种蛋白的分子大小不同,扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异,大的蛋白分子会被先洗脱出来,分子越小,越晚洗脱,从而达到分离蛋白的目的。

  凝蛋白层析柱中的填料大多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,在不同的流动相中溶胀变化差异比较大,因此,蛋白层析柱管也不同一般的玻璃柱,柱床长度通常可调节,分为一端可调轴向压缩和两端可调轴向压缩柱。汇通色谱现推出BSXK夹套式蛋白层析柱和Better Glass系列蛋白层析柱,广泛应用于蛋白、多肽、抗体、酶、病毒、重组蛋白等生物分子纯化。

 

  下面让我们来了解一下蛋白层析柱的特点有哪些。

  1、柱塞设计,柱填装体积可根据需要自行调整,一根柱管就可代替多根固定柱管;

  2、人性化设计,操作简单,清洗方便,易于拆卸组装;

  3、流路多为惰性材料,溶剂耐受性能好;

  4、筛板孔径可自定义,适用于各种规格填料;

  5、无截留死体积,保证内部填料分布均匀,重现性好;

  6、关键部分采用PEEK材质,生物兼容性好;

  7、夹套可维持一定的热稳定操作温度,针对敏感样品纯化具有冷却外壳;

  8、BSXK空柱管材料为高硼硅玻璃,可以目测到柱床状态,及时进行色谱柱重新填装,提高实验效率;

  9、玻璃材质使分离过程更加直观;

  10、种类丰富,可根据要求选定一端可调轴向压缩和两端可调轴向压缩柱;

  应用范围

  ●蛋白纯化:用于从复杂混合物中纯化出目标蛋白质,广泛应用于生物制药和生物化学研究。

  ●核酸纯化:部分层析技术也可用于纯化核酸等其他生物大分子。

  操作步骤

  ●装柱:选择适合的层析介质装填入柱,确保介质均匀无气泡。

  ●平衡:用缓冲液预先平衡层析柱,准备样品上样。

  ●上样:将准备好的蛋白质样品缓慢加入柱顶,避免扰动床层。

  ●洗脱:根据层析类型,采用适当的洗脱液将结合的蛋白质按顺序从柱中洗脱出来。

  ●收集:从柱出口收集洗脱液,并进行检测和分析,以获得纯化后的蛋白质

 

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