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想知道亲和层析空柱该如何进行上样那就不要错过本篇

更新时间:2022-11-21      点击次数:645
  亲和层析空柱是专为抗体、重组蛋白和其他生物大分子纯化、脱盐、浓缩而设计的。公司提供1ml和5ml两种规格的中压层析空柱,客户可根据样本特性,灵活地选用合适的柱管及其相关填料介质(包括离子交换、免疫亲和、分子筛和反相等类型)。
 
  亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析空柱上样时应注意选择适当的条件,包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等,以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。

 

 
  一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢,所以样品液的浓度不易过高,上样时流速应比较慢,以保证样品和亲和吸附剂有充分的接触时间进行吸附。
 
  特别是当配体和待分离的生物大分子的亲和力比较小或样品浓度较高、杂质较多时,可以在上样后停止流动,让样品在层析柱中反应一段时间,或者将上样后流出液进行二次上样,以增加吸附量。样品缓冲液的选择也是要使待分离的生物大分子与配体有较强的亲和力。另外样品缓冲液中一般有一定的的离子强度,以减小基质、配体与样品其它组分之间的非特异性吸附。
 
  生物分子间的亲和力是受温度影响的,通常亲和力随温度的升高而下降。所以在上样时可以选择适当较低的温度,使待分离的物质与配体有较大的亲和力,能够充分的结合;而在后面的洗脱过程可以选择适当较高的温度,使待分离的物质与配体的亲和力下降,以便于将待分离的物质从配体上洗脱下来。
 
  上样后用平衡洗脱液洗去未吸附在亲和吸附剂上的杂质。平衡缓冲液的流速可以快一些,但如果待分离物质与配体结合较弱,平衡缓冲液的流速还是较慢为宜。
 
  如果存在较强的非特异性吸附,可以用适当较高离子强度的平衡缓冲液进行洗涤,但应注意平衡缓冲液不应对待分离物质与配体的结合有明显影响,以免将待分离物质同时洗下。
 
  以上内容便是本次为大家分享关于亲和层析空柱如何上样的相关信息,希望大家在看完之后能够有所收获,让我们下次再见吧。

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