亲和层析空柱是生物分离纯化领域的核心工具，通过特异性配体与目标分子的结合实现高效纯化。其操作规范性与安全性直接影响实验结果的可重复性与人员安全，以下从安装、装填、使用到维护全流程解析操作规范与关键注意事项。
一、操作前准备：
1.环境要求：操作需在清洁、干燥的实验台中进行，避免粉尘、有机物污染空柱内壁或填料。
2.物料检查：确认空柱无裂痕、接口螺纹完好，配套筛板、填料及缓冲液符合实验设计要求。
3.个人防护：佩戴手套、护目镜及实验服，若涉及毒性或传染性样品，需额外穿戴防护面罩与防溅围裙。
二、空柱安装与装填规范
1.空柱组装：
•将下筛板(带支撑网格)轻放入空柱底部，避免刮伤内壁；
•若为空柱套装(含上下筛板)，按说明书顺序安装，确保筛板与柱体密封圈紧密贴合。
2.装填填料：
•预处理填料：将亲和填料(如Ni-NTA树脂)用平衡缓冲液(如20mM Tris-HCl,pH 7.4)充分悬浮，去除保存液中的甘油或防腐剂；
•缓慢倒入：将填料悬液沿空柱内壁匀速倒入(避免垂直冲击导致筛板移位)，装填高度建议为柱体有效体积的70%-80%(如10mL空柱装填7-8mL填料)；
•压实与排气：用缓冲液冲洗柱壁残留填料，连接恒流泵以低流速(0.5-1mL/min)通液，排除气泡(观察柱床无分层或空隙)，较终形成均匀、稳定的柱床层。
三、使用过程中的关键规范
1.连接系统：将装填后的空柱与层析系统(如AKTA、手动泵)连接时，确保接口螺纹拧紧(避免漏液)，并用缓冲液预平衡柱床(至流出液pH/电导率与进料液一致)。
2.上样操作：
•样品需经0.22μm滤膜过滤，上样流速控制在0.1-0.5mL/min；
•若样品黏度高，需稀释或离心后上样，避免柱床塌陷。
3.清洗与洗脱：
•先用平衡缓冲液清洗未结合杂质；
•再用特异性洗脱液温和洗脱目标分子，避免剧烈pH变化导致蛋白变性。
四、安全注意事项
1.生物安全：若处理病原体或毒性样品，需在BSL-2及以上实验室操作，废弃填料与缓冲液按生物危害废物处理。
2.化学安全：避免接触强酸、强碱或有机溶剂，若不慎接触皮肤需立即用大量清水冲洗并就医。
3.物理安全：装填时防止筛板脱落砸伤手部，高压洗脱时远离接口处，避免爆管伤人。
五、维护与存储
使用后需用20%乙醇或0.1M NaOH溶液冲洗空柱并保存，短期存放可保持湿润状态，长期存放建议拆卸筛板与填料，单独密封避光保存。
亲和层析空柱的操作规范涵盖安装、装填、使用到维护全流程，严格遵循每一步骤(如低流速装填、预平衡、温和洗脱)可确保分离效率与柱床寿命；同时，生物与化学安全防护是实验人员的必须要有的意识。只有规范操作与安全意识并重，才能获得高纯度目标产物并保障实验室安全。
欢迎来到上海宸乔生物科技有限公司网站！