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新推出蛋白层析柱
点击次数:1389 发布时间:2016-11-18

2 、装柱说明
2.1  凝胶的预处理
Sephadex LH-20 为干粉,初次使用前必须进行预处理。溶胀过程中严禁使用磁力搅拌, 以
免使微球破碎。
加入足够的去离子水进行溶胀,室温 3 小时以上,使其充分膨胀。亦可选择 20-50%乙醇进 行
溶胀,首次溶胀不要选择纯有机溶剂。 Sephadex LH-20 样品 1g 在水中的床体积是
4.5-5.5ml,在纯乙醇中的床体积是 3.5-4.5ml。首次使用 Sephadex LH-20,可用 0.1M
NaOH 浸泡24小时,然后用去离子水清洗干净。
将溶胀好的微球按照 3:1(v/v)加入水或 buffer 搅拌使其形成均匀的 75%胶悬液。如果是
重复使用的可以将 20%乙醇倾去,加水或 buffer 搅拌均匀成 75%的胶悬液。
2.2  装柱材料及装柱溶液
层析柱:以 GE XK16/200 或宸乔 LK15200 为例进行进行介绍
装柱仪器:低压层析系统 装柱溶液:去离子水
注:所使用的材料及溶液应与色谱操作的温度一致;层析柱筛网
孔径为 28μm(500 目)或 18μm(800 目)。
计算所需介质的量:柱床体积为 1L 时所需 75%胶悬液约为 1*1.15/0.75=1.53L。
装柱:
1). 检查层析柱,确保各部件完整、干净。安装下柱头,拧紧 O 型圈后,将层析柱垂直固定 在
铁架台上,用水平仪检查并调整,使层析柱保持水平。
2). 层析柱中加入适量的装柱溶液,以除去柱子中的空气。关闭柱子出口,柱内保留 1-2cm
上海宸乔生物科技有限公司
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高度的装柱溶液。
3). 用玻璃棒紧靠柱内壁引流,将胶悬液连续倒入层析柱中,以减少气泡的产生。介质自然
沉降至体积不再变化,此时介质和溶液出现分层,上层溶液完全澄清。
4). 连接上柱头至低压层析系统,开泵以一定流速排出管路中残留的空气,暂停系统,将上
柱头安装至层析柱上,柱头下端距离胶面约 1cm,开泵以 30cm/h 流速压柱至柱床体积不
再变化。暂停系统,略拧松 O 型圈,向下转动调节杆使下端距离胶面 0.5-1cm。
5). 拧紧 O 型圈,开泵以zui大流速 70%压柱 3CV 以上,至柱床体积不再变化,在界面处做
好标记。
6). 关闭泵,关闭柱下端出口,使层析柱上端和泵断开,向下转动调节杆,至记号处以下 0-
0.5cm 停止,关闭上接口。装柱完成。

联系人:王萍
18801803238
021-59100893
021-59101335
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